Électrophorèse sur gel

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Cette boîte remplie de liquide et alimenté par une source d'énergie est utilisée pour l'électrophorèse sur gel.

Électrophorèse sur gel est une technique de séparation de molécules (telles que des protéines, de l'ADN ou des fragments d'ARN) en fonction de la taille et implique la migration des particules dans un gel donné durant l'application d'une différence de potentiel.[1] Molécules d'ADN linéaire se séparent selon la taille lorsqu'il est soumis à un champ eletric à travers une matrice de gel.[2] Cette technique permet aux biologistes de mesurer la taille des fragments d'ADN sans eux séquençage puisque, comme la vitesse de migration est fonction de la longueur du fragment, la mesure des distances de migration peuvent être utilisées pour estimer ces fragments de tailles.[3] Les systèmes de gel de séquençage utilise une source de haute tension (1500-3000V).[4] Après l'électrophorèse est terminée, les molécules d'ADN peuvent être visualisées par coloration du gel avec des colorants fluorescents.[2] La technique a été appliquée à la génétique des populations, en 1966, par Lewontin et Hubby.[5]

Comment cela fonctionne

Les acides nucléiques ont une signification squelette phosphodiester qu'ils portent de nombreux groupes phosphates chargés négativement, de sorte que, lorsqu'il est présent dans un champ électrique, ils ont tendance à migrer vers l'électrode positive.[6] Lors de la migration d'un gel poreux, les molécules d'acides nucléiques peuvent être séparés selon leur taille.[6] Les molécules devant être triées sont distribués dans un puits ou chambre dans la matière de type gel. Le gel est placé dans une chambre d'électrophorèse, qui est ensuite reliée à une source d'alimentation.

Préparation à une électrophorèse.

Lorsque le courant électrique est appliqué, les grosses molécules se déplacent plus lentement à travers le gel, tandis que les petites molécules se déplacent plus rapidement.

Après avoir effectué des fragments d'électrophorèse sont séparés selon leur taille.

Après électrophorèse a été effectuée, les molécules dans le gel peut être teinté avec des colorants pour les rendre visibles. L'ADN peut être visualisée à l'aide de bromure d'éthidium, qui, lorsqu'il est intercalé dans l'ADN, est fluorescent sous une lumière ultraviolette.

Après coloration au bromure d'éthidium et utilisant de la lumière ultraviolette.

Types de gel

Bandes d'ADN séparés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et rendue visible par coloration au bromure d'éthidium et visualisation sous lumière ultra-violette.
  • Agarose
  • Polyacrylamide
  • Amidon

Voir aussi

Références

  1. (en) Conoley Chris et Hills Phil, Chemistry, London, Harper Collins Publishers, 2008, 3e éd. (ISBN 978-0-00-726748-4), p. 377 
  2. 2,0 et 2,1 (en) Watson James D. et Baker Tania A., Molecular Biology of the Gene, San Francisco, CA, Pearson, Benjamin Cummings, 2004, 5e éd. (ISBN 0-8053-4635-X) 
  3. Pevzner Pavel A., Computational Molecular Biology: An Algorithmic Approach, Cambridge, Massachusetts, The MIT Press, 2000 (ISBN 0-262-16197-4), p. 273 
  4. Alphey Luke, DNA Sequencing:From Experimental Methods to Bioinformatics, New York, Springer/Bios Scientific Publishers, 1997 (ISBN 0-387-91509-5), p. 53-62 
  5. Lester Lane P. et Bohlin Raymond G., The Natural Limits to Biological Change, Dallas, Texas, Probe Books, 1989 (ISBN 0-945241-06-2), p. 61 
  6. 6,0 et 6,1 Strachan Tom et Read Andrew P, Human Molecular Genetics, New York, Garland Science, 2011, 4e éd. (ISBN 978-0-8153-4149-9), p. 204-205